지실 열수추출물의 구성 성분에 의한 위장관 운동 촉진 효과의 기전 연구

Abstract

Poncirus trifoliate (L.) Raf. (Rutaceae), 일명 Poncirus fructus(PF)로 명명된 지실은 탱자의 미성숙과실로써, 소화 불량이나 건위를 목적으로 사용되어온 생약으로, 위장관 운동 촉진 효과 (prokinetic effect)를 갖는 것으로 알려져 있으며. 5-Hydroxytryptamine4 Receptor (5-HT4R)를 활성화 시켜서 이러한 위장관 촉진 효과가 나타나는 것이 잘 알려져 있다. 그러나, 대표적인 5-HT4R 효능제인 cisapride와 비교했을 때 5-HT4R 의 활성 정도는 다소 약한 것으로 나타나, 5-HT4R 이외의 다른 기전의 관여 가능성이 제시되었다. 실제로 동 실험실의 후속 연구에서 지실 열수추출물 (PF-W)이 모틸린 수용체 (motilin receptor, MTLR)가 아닌 그렐린 수용체 (ghrelin receptor, GHLR)를 활성화 시킨다는 사실을 새롭게 밝혀낸 바 있다. 하지만, PF-W에 포함된 어떤 단일 물질이 이러한 기능을 유발하는 지에 대해서는 아직까지 알려져 있지 않다. 따라서 이번 연구에서는 다양한 지실 추출물 구성성분 중 어떤 단일 물질이 위장관 운동 촉진 효과 기전을 나타내는지를 밝히는 것을 목표로 하였다. 먼저 지실의 단일구성성분의 GHLR의 활성화 여부를 확인하였다. G-protein coupled receptor (GPCR)인 GHLR은 활성화되면 세포 내 칼슘 농도가 증가한다. HEK-293T 세포주에 GHLR을 과발현시킨 후 PF-W의 단일 구성 물질로 잘 알려져 있는 12개의 물질들을 처리한 다음 칼슘 이미징 방법을 이용하여 세포 내 칼슘 농도 변화를 관찰하였다. 측정 결과 12개의 주요 구성 성분 중 naringin과 naringenin이 GHLR을 활성화 시키는 단일 구성 성분임을 알 수가 있었으며, 동일한 농도에서는 naringin이 활성이 더 활발한 것을 확인하였다. 또한 5-HT4R 활성화 여부도 더불어 확인하였다. 5-HT4R 가 활성화 될 시에는 세포 내에 cAMP 농도가 증가하게 되며, 효소결합 면역흡착 분석법 (Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)을 통해 측정이 가능하다. 측정 결과 PF-W 처리 시에는 cAMP 증가를 확인하였으나, 실험에 사용한 단일 구성 성분들은 cAMP를 변화시키지 못하였다. 본 연구를 통해 지실을 구성하고 있는 성분 중 naringin과 naringenin이 위장관 운동을 촉진시킨다고 알려진 GHLR를 활성화시킴으로써 위장관 촉진 효과를 나타낸다는 것을 알 수 있었으며. 5-HT4R를 활성화 시키는 단일 물질은 찾지 못하였다.