UPLC-DAD를 이용한 참당귀의 정량과 패턴분석

Abstract

참당귀(Angelica gigas)는 미나리과(Umbelliferae)에 속하는 다년생 초본식물로 그 뿌리를 당귀라고 하여 약으로 사용한다. 당귀는 예로부터 대표적인 보혈제로 사용되어 왔으며, 진통, 진정, 강장작용이 알려져 있어 부인병이나 혈핵순환을 위해 사용된다. 대표적인 성분으로는 coumarin계 화합물인 decursin이나 decursinol angelate 등이 잘 알려져 있으며 이들에는 진통, 진경, 항암, 혈소판응집억제 작용 등의 효과가 있는 것으로 보고되어 있다. 당귀는 한국에서는 참당귀의 뿌리를 사용하며 중국에서는 중국당귀(A.sinensis), 일본에서는 일당귀(A. acutiloba)를 사용한다. 이들은 각각 다른 성분과 각 함량을 가지고 있지만 한약재 특성상 뿌리를 건조 후 절단하여보관하므로 이들의 구별이 쉽지 않다. 따라서 본 연구에서는 분석시간이 빠른 UPLC-DAD를 이용하여 한국에서 구입한 참당귀 87종과, 중국에서 구입한 참당귀 81종과 중국당귀 18종에 대하여 활성성분 6가지를 각각정량하고 패턴분석으로 통해 비교하여 보았다. 성분의 분리를 위하여 참당귀(A. gigas)의 뿌리 500 g을 100% MeOH로 추출하여 농축한 뒤 증류수로 현탁하여 ethyl aceate, n-BuOH로 분획을하였다. 이 중 ethyl acetate층을 HPLC를 이용하여 5가지 분획으로 나누고, 이들을 HPLC로 다시 분리하여 첫 번째 분획에서 nodakenin(4.6 mg), 두 번째 분획에서 marmesin(4.0 mg)과 decursinol(3.0 mg), 네 번째 분획에서 demethylsuberosin(22.0 mg), 다섯 번째 분획에서 decursin(14.1 mg)과 decursinol angelate(10.3 mg)을 얻어 표준물질로 사용하였다. UPLC로 실험한 결과 각 시료당 12분의 분석 시간동안에 크로마토그램을 얻을 수 있었으며 이 분석 방법으로 6가지 표준물질에 대한 validation을 시행하였다. 6가지 표준물질 모두 correlation efficient(R2)가 0.9997 이상을 나타냈고, 검출한계는 0.0004-0.0246 μg이었으며 검량한계는 0.0007 -0.0744 μg으로 나타났다. 정밀성(precision)은 intra-day, inter-day 모두 RSD값이 3%이하였으며, 정확성(accuracy)은 97-103%로 분석법이 유의성이 있음을 확인하였다. 각 당귀의 정량을 실시하여 A. sinensis에서는 6가지 표준물질에 대하여 검출한계 이하의 값을 확인하였으며, 한국산 A. gigas와 중국산 A.gigas의 함량에 차이가 있음을 확인하였다. 패턴분석은 UPLC에서 얻은 크로마토그램을 SIMCA-P를 통한 PCA와 PLS-DA를 시행하여 확인하였다. 이 결과에서 A. gigas와 A. sinensis는 명확하게 구별이 가능하였으며, 한국산 A. gigas는 81.6% 판별이 가능하였고 중국산 A. gigas는 93.8% 판별이 가능함을 확인하였다.