애기석위의 뇌신경세포 보호 활성 플라보노이드

Abstract

천연물로부터 퇴행성 뇌신경계 질환 치료제로 개발될 수 있는 후보물질을 도출하기 위하여 마우스의 hippocampus 로부터 유래한 HT22 세포주에 글루타메이트로 독성을 유발시킨 후 이를 검색계로 이용하여 뇌신경세포 보호활성을 검색하던 중 애기석위의 메탄올 추출물이 유의성 있는 활성을 나타냄을 확인할 수 있었다. 애기석위 (Pyrrosia petiolosa (H.Christ et Baroni) Ching.)는 고란초과 (polypodiaceae)에 속하는 상록다년초로서 flavonoid, flavonoid glycoside, tannin, hopene, xanthonoid, saponin 등이 보고 되었고, 민간에서 애기석위는 이뇨작용이 있어 방광 및 요로결석, 급성신염의 수종, 진해, 거담에 사용 되어왔고 항세균 활성이 보고되어 있다. 그러나 뇌신경세포 보호 활성과 그 유효 성분은 연구가 미흡한 실정이다. 이에 본 연구에서는 애기석위로부터 뇌신경세포 보호 활성을 갖는 물질을 활성 지향적인 방법으로 분리하고 그 화학구조를 밝히고자 하였다. 애기석위의 총 메탄올 추출물을 물에 현탁한 다음 용매의 극성에 따라 n-Hexane, CHCl3, EtOAc, n-BuOH 분획물로 나누었고, 이 중에서 뇌신경세포 보호 활성을 나타내는 n-BuOH분획을 대상으로 활성지향적 분리법으로 총 10 종의 화합물을 분리하였다. 분리한 화합물들은 각종 이화학적 성상 및 분광학적 분석을 통하여 그 구조를 각각 kaempferol 4'-O-[6'''-O-(3''-hydroxycinnamoyl)-β-D-glucopyranosyl-(2→1)-β-D-glucopyranoside] (1), kaempferol 3-O-α-rhamnopyranosyl-7-O-α-arabinofuranoside (2), kaempferol 3-O-β-gluopyranosyl-7-O-apiofuranoside (3), astragallin (4), kaem pferol 3,7-O-β-D-diglucopyranoside (5), huazhongilexone 7-O-β-D-glucopyranuronic acid (6), huazhongilexone 7-O-(methyl-β-D-glucopyranuronic acid) (7), naringenin 7-O-(methyl-β-D-glucopyranuronic acid) (8), gossypetin 7-O-β-D-glucopyranoside (9), chlorogenic acid (10) 으로 동정하였다. 화합물 1, 2, 3, 4, 9는 flavonol 계열, 화합물 6~8 은 flavanone 계열, 화합물 10은 phenolic 계열 물질이다. 화합물 1~3 과 6은 천연에서, 화합물 7 과 8 은 이 식물에서 처음으로 분리, 보고되는 물질이다. 분리한 10개의 화합물에 대하여 글루타메이트로 독성을 유발시킨 HT22 세포주에서 뇌신경 보호 활성을 검색한 결과, 화합물 7 과 8 에서 유의성 있는 뇌신경세포 보호 활성을 나타내었다.

The study was conducted to investigate neuroprotective constituents from Pyrrosia petiolesa (Polypodiaceae), which exhibited the significant neuroprotective activities against glutamate induced-oxidative stress in HT22 hippocampal cells. A methanolic extract was suspended in water and then subsequently fractionated with n-Hexane, CHCl3, EtOAc, n-BuOH. The n-BuOH fraction of Pyrrosia petiolosa significantly attenuated glutamate-induced oxidative stress in HT22 hippocampal cells. Thus, ten compounds were isolated from the n-BuOH fraction using bioactivity-guided fractionation and various chromatographic techniques. This study reports 6 flavonol glycosides, three flavanone glycosides, one phenolic compound. The compounds were identified as kaempferol 4'-O-[6'''-O-(3''-hydroxy cinnamoyl)-β-D-glucopyranosyl-(2→1)-β-D-glucopyranoside] (1), kaempfe-rol 3-O-α-rhamnopyranosyl-7-O-α-arabinofuranoside (2), kaempferol 3-O-β-gluopyranosyl-7-O-apiofuranoside (3), astragalin (4), kaempferol 3,7-O-β-D-diglucopyranoside (5), huazhongilexone 7-O-β-D-glucopyranuronic acid (6), huazhongilexone 7-O-(methyl-β-D-glucopyranuronic acid) (7), naringenin 7-O-(methyl-β-D-glucopyranuronic acid) (8), gossypetin 7-O-β-D-glucopyr-anoside (9), chlorogenic acid (10). Among them, compounds 7 and 8 are reported for the first time from Pyrrosia petiolosa. And, compounds 1, 2, 3 and 6 are reported for the first time in nature. Ten compounds from P. petiolosa were experimented for their neuroprotective activity on HT22 hippocampal cell line. Among these compounds, 7 and 8 showed moderate neuroprotective activities glutamate induced-oxidative injury in HT22 cells line.