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대장균에서 30Kc19-30Kc6 퓨전 단백질의 수용성 생산과 포유동물세포에서의 항 에이파토시스 효과 : Soluble Expression of 30Kc19-30Kc6 Fusion Protein in E. coli and Its Anti-apoptotic Effect in Mammalian Cell Systems
DC Field | Value | Language |
---|---|---|
dc.contributor.advisor | 박태현 | - |
dc.contributor.author | 최정선 | - |
dc.date.accessioned | 2017-07-14T02:22:23Z | - |
dc.date.available | 2017-07-14T02:22:23Z | - |
dc.date.issued | 2014-02 | - |
dc.identifier.other | 000000016692 | - |
dc.identifier.uri | https://hdl.handle.net/10371/122430 | - |
dc.description | 학위논문 (석사)-- 서울대학교 대학원 : 협동과정 바이오엔지니어링전공, 2014. 2. 박태현. | - |
dc.description.abstract | 재조합 단백질을 생산하는 포유동물 세포 배양 과정에서 apoptosis의 중요성은 널리 인식되어 왔다. 이전 연구에서 본 그룹은 누에 체액과 누에 체액 단백질을 이용하여 다양한 세포에서 apoptosis 억제에 대한 연구를 수행하였다. 특히, 누에 체액 단백질 중 하나인 30Kc6 단백질을 Chinese hamster ovary(CHO) 세포에서 발현시켜 anti-apoptosis 효과와 EPO와 같은 재조합 단백질의 생산이 향상됨을 보고하였다. 또한 30Kc6 단백질을 E. coli에서 inclusion body 형태로 발현시켜 정제함으로써 anti-apoptosis 효과를 보려는 연구도 수행하였다. NusA 단백질을 발현 파트너로 도입하여 E. coli에서 soluble form으로 발현시켰으나 효소 반응을 통해 NusA를 제거하는 추가적인 정제 과정이 필요했다. 본 연구에서는 30Kc19을 발현 파트너로 도입함으로써 30Kc6를 soluble form으로 발현시키고 두 단백질의 기능을 모두 갖는 융합 단백질을 만들고자 하였다. 30Kc19 단백질은 E. coli에서의 soluble expression을 위해 선택되었고, 세포투과성과 재조합 단백질의 생산을 향상시키는 효과를 갖고 있다. 30Kc19-30Kc6 단백질은 E. coli에서 soluble form으로 발현되었고, 배지에 첨가하였을 때 HeLa 세포와 CHO 세포에서 세포 내부로 이동함을 확인하였다. 배지에 첨가된 30Kc19-30Kc6 단백질은 HeLa와 CHO 세포에서 apoptosis를 효 과적으로 억제함을 확인하였다. 또한 CHO 세포에서 apoptosis 억제함과 더불어 EPO의 비생산성을 향상시킴으로써 EPO의 전체 생산량이 증가함을 확인하였다. 이를 통해 30Kc19-30Kc6 단백질이 재조합 단백질을 생산하는 세포 배양의 첨가물로서 사용될 수 있을 것으로 기대되며, 30Kc19은 융합단백질에 soluble expression과 세포투과성을 부여하는 발현파트너로서의 가능성도 볼 수 있었다. | - |
dc.description.tableofcontents | 요약 i
목차 iii 그림목차 v 표목차 vi 1. 서론 1 1.1. Apoptosis 1 1.1.1. Apoptosis 개요 1 1.1.2. Apoptosis 작용 기작 2 1.2. 누에 체액과 누에 체액 단백질에 대한 선행 연구 5 1.2.1. 누에 체액 5 1.2.2. 30K 단백질 6 1.3. E. coli에서 재조합 단백질의 수용성 발현 7 2. 실험 재료 및 방법 9 2.1. pET-23a/30Kc19, pET-23a/30Kc19-30Kc6 plasmid 제작 9 2.2. 30Kc19, 30Kc19-30Kc6 단백질의 발현 및 정제 12 2.3. 세포 배양, 세포 농도와 생존율 측정, ELISA 분석 13 2.4. 면역세포화학적 분석(Immunocytochemical assay) 14 2.5. Immunoblot analysis 15 2.6. Apoptosis 유도 16 2.7. 유세포 분석(Flow cytometric analysis) 17 2.8. 미토콘드리아 막 전위와 ATP 분석(MMP and ATP) 17 3. 결과 및 고찰 19 3.1. 재조합 단백질의 크기 및 농도 확인 19 3.2. 30Kc19-30Kc6 단백질의 세포 투과성 22 3.3. 30Kc19-30Kc6 단백질의 apoptosis 억제 26 3.4. 재조합 단백질에 의한 EPO 생산성 향상 32 3.5. 재조합 단백질에 의한 미토콘드리아 막 전위의 유지와 ATP생산량의 증가 35 4. 결론 37 5. 참고문헌 38 Abstract 44 | - |
dc.format | application/pdf | - |
dc.format.extent | 2204975 bytes | - |
dc.format.medium | application/pdf | - |
dc.language.iso | ko | - |
dc.publisher | 서울대학교 대학원 | - |
dc.subject | 30Kc6 | - |
dc.subject | 30Kc19 | - |
dc.subject | anti-apoptosis | - |
dc.subject | soluble expression | - |
dc.subject | expression partner | - |
dc.subject | cell-penetrating property | - |
dc.subject | recombinant protein production | - |
dc.subject.ddc | 660 | - |
dc.title | 대장균에서 30Kc19-30Kc6 퓨전 단백질의 수용성 생산과 포유동물세포에서의 항 에이파토시스 효과 | - |
dc.title.alternative | Soluble Expression of 30Kc19-30Kc6 Fusion Protein in E. coli and Its Anti-apoptotic Effect in Mammalian Cell Systems | - |
dc.type | Thesis | - |
dc.contributor.AlternativeAuthor | Jeongseon Choi | - |
dc.description.degree | Master | - |
dc.citation.pages | vi, 45 | - |
dc.contributor.affiliation | 공과대학 협동과정 바이오엔지니어링전공 | - |
dc.date.awarded | 2014-02 | - |
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