상아질 접착제의 세포독성 평가방법에 관한 연구

Abstract

1. 연구목적 상아질 접착제는 상아질과 수복용 복합레진간의 견고한 접착을 얻고 접착파괴를 일으키는 미세누출을 최소화하기 위해 사용되고 있다. 상아질 접착제는 완전한 중합이 불가능하므로 중합과정에서 필연적으로 미중합 레진단량체가 발생하게 된다. 미중합 레진 단량체는 상아세관을 통해 치수세포에 영향을 줄 수 있으므로 레진 단량체의 중합은 접착강도와 생체적합성의 측면에서 매우 중요하다고 볼 수 있다. 기존의 연구결과들은 실제 임상에서 상아질 접착제가 치수세포에 대한 위해 없이 널리 사용되는 것에 반해 높은 세포독성 결과를 보고하고 있다. 이는 기존의 상아질 접착제의 세포독성 평가방법이 상아질 접착제의 세포독성을 과대평가할 가능성이 있다는 점을 시사한다. 상아질 접착제는 실제 임상 조건에서 상부에 수복용 복합레진이 접착되어 사용된다. 이와 같은 조건에서는 상아질 접착제의 중합도에 변화가 나타날 것으로 예상되며 상아질 접착제의 산소 저해층 (oxygen inhibition layer)을 감소시켜 결과적으로 미중합 레진단량체가 감소하여 세포독성의 감소로 이어질 것으로 판단된다. 본 연구의 목적은 상아질 접착제와 접착되는 수복용 복합레진과 산소 저해층이 상아질 접착제의 세포 독성에 미치는 영향을 규명하여 임상에서 상아질 접착제가 사용되는 환경을 효과적으로 반영한 상아질 접착제의 세포독성 평가방법을 개발하는 것이다. 2. 재료 및 방법 본 연구에서 사용된 상아질 접착제는 4세대에서 7세대의 제품인 Adper Scotchbond Multipurpose Plus (3M ESPE, St Paul, MN, USA), Adper Single Bond 2 (3M ESPE), Prime & Bond NT (Dentsply De Trey, Konstanz, Germany), Clearfil SE Bond (Kuraray Medical Inc. Osaka, Japan), One-Up Bond F Plus (Tokuyama Corporation, Tokyo, Japan) 그리고 iBond (Heraeus Kulzer, Hanau, Germany)이며 수복용 복합레진은 Ceram X (Dentsply)를 사용하였다. 세포독성 시험을 수행하기 위해 L929 정상생쥐섬유모세포 (mice fibroblasts)를 배양하였다. 상아질 접착제의 세포독성 평가를 위해 종래의 방법인 추출법 (연속 희석법)을 수행하였으며, 수복용 복합레진과 산소 저해층의 영향을 평가하기 위해 수복용 복합레진 디스크와 접촉된 상아질 접착제 시편을 제작하고 이를 추출하는 방식의 변형된 한천 확산법을 시행하였다. 수복용 레진이 상아질 접착제의 중합도에 미치는 영향을 평가하기 위해 미중합된 수복용 레진 또는 기중합된 수복용 레진 디스크 상부에 도포한 상아질 접착제의 표면 경도를 비커스 표면경도 측정법에 따라 측정하였다. 또한 상아질 접착제의 초기 염증 반응을 파악하기 위하여 mouse 피하 이식시험을 시행하였다.

3. 결과 연속 희석법 시험결과 모든 상아질 접착제의 추출액은 희석하지 않은 상태에서 세포활성을 완전히 저해하였다. 용매를 건조 시킨 후 수행한 실험결과로 나타난 세포독성은 Adper Scotchbond Multipurpose plus, Clearfil SE bond, One-up Bond F plus, Prime & Bond NT, Adper Single Bond 2 그리고 iBond 순서로 낮아지는 결과를 보였다. 임상조건을 고려한 변형된 한천 확산법 시험 결과 대부분의 상아질 접착제의 세포 독성을 현저히 낮췄다. 수복용 레진과 산소 저해층의 유무가 상아질 접착제의 세포독성에 미치는 정도는 접착제의 종류에 따라 달랐다. 수복용 복합레진의 중합에 따른 상아질 접착제의 중합도 변화를 확인하기 위해 비커스 표면경도 시험을 수행하였다. 시험 결과 수복용 복합레진의 중합에 따른 상아질 접착제의 표면경도의 상승 결과를 통해 수복용 복합레진의 중합이 상아질 접착제의 중합도를 향상시킨다는 점을 간접적으로 확인하였으며 표면 경도의 증가량은 Adper Scotchbond Multipurpose Plus, Clearfil SE Bond, Adper Single Bond 2 그리고 Prime & Bond NT의 순서이다. Mouse 이식 시험결과에서 음성대조군에 비해 상아질 접착제의 염증 반응이 관찰되었으나 그 차이가 두드러지게 나타나지 않았다. 상기의 결과로 판단해 볼 때 종래의 상아질 접착제에 대한 세포독성시험법(추출법)은 생체 내에서의 세포독성을 과대평가하는 것으로 판단되며, 본 연구에서 제안하고 있는 방법 (임상유사조건)은 상아질 접착제가 실제 임상에서 사용되는 조건을 효과적으로 반영하는 평가방법으로 판단된다.