백출의 대식세포 내 산화질소 생성 저해 성분

Abstract

본 연구에서는 염증성 질환을 예방하거나 치료할 수 있는 후보물질을 천연물로부터 도출하기 위하여 lipopolysaccharide (LPS)로 염증반응을 유도한 male mouse 유래 macrophage RAW264.7 세포주를 검색계로 하였다. 천연물을 대상으로 nitric oxide (NO) 생성 억제 활성을 검색하던 중 삽주 뿌리줄기의 총 메탄올 추출물이 유의성 있는 억제 활성을 나타냄을 확인하였다. 백출(Atractylodis Rhizoma Alba)은 삽주의 뿌리줄기 또는 주피를 제거한 것이다. 삽주 (Atractylodes japonica Koidz.)는 국화과(Compositae)에 속하는 식물로서 뿌리줄기는 방향성 건위제로 진정, 이뇨, 지한, 자양, 안태, 면역증강, 항미생물, 항염증을 목적으로 사용되어왔다. 백출은 sesquiterpene과 그 배당체 계열 성분과 polyacetylene 계열 성분 등이 주성분으로 보고되어 있고, 항염 활성에 대하여 보고된 적이 있으나, 이와 관련된 성분 연구는 아직까지 체계적으로 이루어진 바 없다. 이에 본 연구에서는 항염 활성을 갖는 성분을 활성지향적인 방법으로 분리, 규명한 후, Griess assay를 이용하여 산화질소 생성 억제능을 검토하고자 하였다. 건조된 백출 약 4 kg의 100% MeOH 추출물을 증류수에 현탁한 후 용매의 극성에 따라 n-hexane, CHCl3, EtOAc, n-BuOH, 수용액 층으로 각각 분획하였다. 이 중 유의성 있는 NO 생성 억제 활성을 나타낸 n-hexane, CHCl3 분획물을 대상으로 silica gel, sephadex LH-20 column chromatography와 HPLC 등을 차례로 진행하여 활성지향적 분리기법으로 총 14종의 화합물을 분리하였다. 각각의 화합물들은 UV, IR, CI/ESI-MS, 1H-NMR, 13C-NMR, 1H-1H COSY, selective TOCSY, HMQC, HMBC, NOESY, DEPT spectrum과 선광도 등의 분광학적 데이터와 이화학적 성상을 종합하여 atractylenolide III (1), atractylenolide II (2), 8β-methoxyatractylenolide (3), 4,15-epoxy-8β-hydroxyasterolide (4), (3R)-3-hydroxyatractylenolide III (5), taenialactam B (6), 8-epiasterolide (7), eudesma-3,7(11)-dien-5,15-dihydroxy-8α,13-olide (8), 4(15)-eudesmene-1β,7,11-triol (9), 3-eudesmene-1β,7,11-triol (10), eudesm-7(11)-en-4α-ol (11), eudesm-4(15),7-diene-11-ol (12), atractylodiol (13), daucosterol (14)로 동정하였다. 화합물 1～12는 sesquiterpenene 계열, 13은 polyacetylene 계열, 14는 steroid 배당체 계열 물질이다. 이들 화합물 중 8, 12는 천연에서 처음 분리, 보고되는 물질이고, 화합물 5, 6, 9, 10은 이 과 식물에서, 화합물 7은 이 속 식물에서, 화합물 3, 4, 11은 이 식물에서 처음 분리, 보고되는 물질이다. RAW264.7 세포주를 이용한 Griess assay를 시행하여 분리된 화합물들의 산화질소 생성 억제 활성을 측정하였다. 화합물 중 2, 10이 용량 의존적으로 산화질소의 생성을 억제하는 것으로 나타났으며 8-hydroxyl moiety가 없는 화합물 2가 화합물 1, 4, 5보다 유의성있게 억제활성을 나타내었다.