Cis-platin 내성 방광암세포주에 대한 Trichostatin A의 항암효과 분석

Abstract

목적: 진행성 방광암에 있어 cis-platin 근간의 항암요법은 표준화된 치료로 여겨지고 있으나, cis-platin 내성 방광암이 발생함으로써 그 치료효과가 제한되고 있다. 본 연구에서는 cis-platin 내성 인체 방광암세포주(T24R2)에 대해 histone deacetylase(HDAC) inhibitor의 일종인 trichostatin A(TSA)의 항암효과에 대해 알아보고자 하였다.

대상 및 방법: 방광암 세포주(T24)와 cis-platin 내성 방광암세포주(T24R2)를 여러 농도의 TSA에 노출시킨 후 CCK-8을 통해 세포 증식속도를 측정하였다. 유세포 분석법과 세포 집락 형성능을 분석하여 세포주기 변화와 생존능에 대해 평가하였다. 또한 Western Blot을 통해 p21, cIAP1, XIAP, Bcl-2, Bax의 발현정도와 항암효과 기전을 파악하였다.

결과: CCK-8 분석을 통해 TSA가 두 세포주 모두에서 시간과 농도에 비례하여 암세포증식을 억제함을 확인하였다. 두 세포주 모두에서 TSA가 G1 세포주기 정지를 유발하였으며, 특히 T24R2 세포주의 0.5μM 농도에서 세포고사를 의미하는 sub-G1 분획이 증가함을 확인하였다. 두 세포주 모두에서 TSA 투여 시 집락형성능이 억제되었다. Western Blot을 통해 두 세포주 모두에서 TSA의 농도가 증가함에 따라 p21과 Bax의 발현이 증가하고, Bcl-2, cIAP1, XIAP의 발현이 감소함을 확인하였다.

결론: 본 실험 결과 TSA는 cis-platin 내성 방광암 세포주에 대해 방광암 증식을 억제함으로써 약제의 항암효과를 확인할 수 있었으며, 항암제로 사용될 수 있는 가능성을 확인하였다.

Objective: Cis-platin based chemotherapy is the standard treatment for advanced bladder cancer. However, encountered resistance to cis-platin limits therapeutic efficacy of chemotherapic agent. In this study, we determined anti-tumor effect of a histone deacetylase (HDAC) inhibitor, trichostatin A (TSA) in cis-platin resistant human bladder cancer cells (T24R2).

Materials and Methods: Bladder cancer cell line(T24) and the cis-platin resistant human bladder cancer cell line(T24R2) were exposed to escalating dose of TSA and tumor cell proliferation was examined by CCK-8 assay. To evaluate the changes in cell cycle and survival, flow cytometry and clonogenic assay was performed. Expression of p21WAF1/CIP1, cIAP1, XIAP, Bcl-2, and Bax were analyzed by Western blot.

Results: Based on the CCK-8 assay, acute TSA administration (0.1-2 μM for 24-72 hours) suppressed tumor cell proliferation in a time- and dose-dependent manner (P < 0.05) in all two bladder tumor cell lines. TSA induced G1 phase cell cycle arrest in both bladder cell lines and higher-fraction of sub-G1 (apoptotic portion) with 0.5 μM in T24R2. A significant decrease in colony number was seen with the TSA treatment in the two cell lines. Western blot analysis revealed up-regulated p21 and bax, and down-regulated Bcl-2, cIAP1 and xIAP with the increasing concentrations of TSA in both cell lines.

Conclusions: Our results suggest anti-tumor effect of TSA in inhibiting bladder cancer growths and its potential role as an agent for treating cis-platin resistant bladder cancer.