Prevalence of human papillomavirus infection in oral cancer

Abstract

인유두종 바이러스는 자궁경부암의 원인으로 거의 100%에 가까운 감염을 보인다. 구인두암에서 인유두종 바이러스(HPV) 양성 종양 발생가능성은 비교적 명확하나 다른 두경부암과의 연관성은 아직 뚜렷하지 않다. 인유두종 바이러스 양성 종양의 예후가 인유두종 바이러스 음성 종양과 비교하여 예후가 더 좋다는 보고가 있다. 구강암과 인유두종 바이러스의 연관성을 확인하기 위하여 HPV DNA chip 을 이용하여 구강암에서의 인유두종 바이러스의 발현율 및 고위험군 및 저위험군 HPV를 검출하였으며 HPV 6, 11, HPV 16 L1 및 HPV 18 E6 항체를 이용한 면역조직화학염색을 시행하여 본 연구를 진행하였다. 구강암으로 진단받은 총 106명의 환자를 대상으로 HPV 검사를 시행하였다. HPV의 고위험군 (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 54, 56, 58) 과 저위험군 (6, 11, 34, 40, 42, 43, 44) 의 검출을 위해 DNA chip (MY-HPV chip kit®, Mygene Co.)를 사용하였다. 환자들은 모두 구강암으로 확진을 받은 상태이며 검체는 수술후 절제된 종물에서 추출하였다. 먼저, 원심분리를 통해 조직으로부터 DNA의 정제를 시행하였다. Primer, B-globin for control group, taq polymerase, template DNA, four types of deoxynucleotides등을 사용한 PCR을 이용하여 HPV DNA를 증폭시켰다. 두번째 PCR생성물은 hybridization 시행하였고 최종 chip scanning을 통하여 결과를 분석하였다. 구강암 종물 및 대조군으로 정상조직을 이용하여 면역조직화학염색을 시행하였으며 박절표본에서 파라핀을 제거한 후 3%과산화수소수 처리하였다. 단백질과의 비특이적 반응을 막기 위해 blocking serum을 30분간 처리한후 쥐에서 추출한 anti-HPV16 L1 및 anti-HPV18 E6 를 1:300으로 희석하여 1시간동안 반응시켰다. 이후 이차 항체로 30분간 반응시키고 diaminobenzidine chromogen으로 발색시킨 후 mayer's hematoxylin으로 대조염색을 한후 결과를 분석하였다 106예의 구강암 종물중 7례에서 HPV 양성 반응이 나타났으며, 모두 편평세포암종에서 나타나며 나머지 20예의 기타 암종 및 육종에서는 HPV 양성 반응이 나타나지 않았다. HPV 양성 반응이 나타난 7례중 1례는 HPV 고위험군인 16형이 나타났으며 1예는 HPV 고위험군 16형 및 저위험군 6형이 동시에 나타났다. 3예는 저위험군 6형이 나타났으며 나머지 2예는 고위험, 저위험군을 알 수 없는 기타 HPV유형으로 나타났다. 우리 연구에서는 다른 연구들에 비하여 구강암에서 매우 낮은 인유두종 바이러스가 검출되었다. 한국인 구강암 환자에서 고위험군 HPV 중에서는 HPV 16형이, 저위험군 HPV 중에서는 HPV 6형이 주로 나타났다.