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쥐세포에서 SPS1에 의한 산화·환원 항상성과 악성 종양의 특성 조절
| DC Field | Value | Language |
|---|---|---|
| dc.contributor.advisor | 이병재 | - |
| dc.contributor.author | 허장회 | - |
| dc.date.accessioned | 2017-07-19T09:09:13Z | - |
| dc.date.available | 2017-07-19T09:09:13Z | - |
| dc.date.issued | 2016-02 | - |
| dc.identifier.other | 000000133679 | - |
| dc.identifier.uri | https://hdl.handle.net/10371/131605 | - |
| dc.description | 학위논문 (석사)-- 서울대학교 대학원 : 생명과학부, 2016. 2. 이병재. | - |
| dc.description.abstract | Selenophosphate synthetase (SPS)는 셀레노시스틴 합성시 selenium donor로 작용하는 selenophosphate를 합성하는 효소이다. 고등 진핵 생물에는 SPS1과 SPS2 라는 2가지의 형태의 SPS paralogue가 있으며, 이중 SPS2만이 셀레노시스틴 합성을 촉매하며, SPS1은 셀레노시스틴 생합성 능력은 보이지 않는다. 여러 연구에서 SPS2는 세포의 생존에 필수적이지 않지만 SPS1은 오히려 필수적인 역할을 하는 단백질이라는 것이 제시되었다.
본 연구에서는 포유동물의 세포수준에서 SPS1의 기능을 밝히고자 mouse embryonic cancer cell인 F9 세포에서 RNAi 기술을 이용하여 mouse Sps1 mRNA를 표적으로 결핍 시켰다. Sps1의 결핍에 따라 산화·환원 항상성 조절 유전자인 glutaredoxin1 (Glrx1)의 발현이 감소되었으며 세포내에 reactive oxygen species (ROS)의 일종인 hydrogen peroxide의 축적이 일어났으나 superoxide는 축적되지 않았다. 또한 SPS1 결핍에 의해 악성 종양의 특성인 invasiveness가 감소하는 것을 관찰하였으며 성장저해가 일어나는 것도 관찰되었다. 이런 현상들은 Sps1이 결핍된 세포주에서 down-regulation 되었던 Glrx1을 과발현 시키면, 대조군 정도로 회복되는 것을 관찰하였다. 이러한 결과는 SPS1이 종양 세포의 악성화를 유도하거나 유지시키는데 요구되며, 이러한 과정은 Glrx1과 같은 산화·환원을 조절하는 유전자를 SPS1이 조절하면서 이뤄지고 있음을 제시해준다. | - |
| dc.description.tableofcontents | I. 서론 1
II. 재료 및 방법 10 1. Vector construct 제작 10 1.1. Mouse SPS1 knockdown-resistant (rescue) vector 제작 10 1.2. Mouse와 human Glrx1 과발현 vector 제작 12 1.3. Flag으로 융합된 mouse SPS1 발현 vector 제작 14 1.4. Hydrogen peroxide 탐지 probe 제작 16 2. F9 과 GP2-293 세포 배양 17 2.1. Mouse/human Glrx1 KI과 mouse SPS1 rescue cell line 준비 17 2.2 Hydrogen peroxide 탐지 probe를 발현하는 cell 준비 18 3. CM-H2DCFDA 염색을 이용한 ROS 관찰 19 4. 세포내 Hydrogen peroxide 탐지 20 5. DHE와 MitoSOX 염색을 이용한 세포내 superoxide 관찰 21 6. FACS 분석법에 의한 세포내 ROS의 정량 22 7. Cell growth rate assay 23 8. Invasion assay 23 9. F9 cell로부터 RNA 분리 24 10. RT-PCR 25 11. Real-time PCR 27 12. mouse SPS1의 세포 내 위치 관찰 28 III. 결과 29 1. Sps1의 결핍은 Glrx1의 발현을 억제한다. 29 2. Sps1의 결핍은 세포내 ROS의 축적을 유도한다 32 3. Sps1 결핍은 세포내 superoxide의 축적을 동반하지 않는다 34 4. Sps1 결핍은 세포내 hydrogen peroxide의 축적을 유도한다 36 5. Sps1의 결핍은 많은 양의 ROS 축적을 동반한다 38 6. Sps1 결핍은 growth rate의 감소를 유도한다 40 7. Sps1 결핍은 invasiveness의 감소를 유도한다 42 8. Mouse SPS1은 세포 내 전반적으로 위치한다 44 IV. 고찰 46 V. Appendices 50 VI. 참고문헌 53 Abstract 60 | - |
| dc.format | application/pdf | - |
| dc.format.extent | 1230606 bytes | - |
| dc.format.medium | application/pdf | - |
| dc.language.iso | ko | - |
| dc.publisher | 서울대학교 대학원 | - |
| dc.subject | cancer | - |
| dc.subject | reactive oxygen species | - |
| dc.subject | 셀레늄 | - |
| dc.subject | 셀레노시스틴 | - |
| dc.subject | 셀레늄단백질 | - |
| dc.subject | selenophosphate synthetase 1 | - |
| dc.subject.ddc | 570 | - |
| dc.title | 쥐세포에서 SPS1에 의한 산화·환원 항상성과 악성 종양의 특성 조절 | - |
| dc.type | Thesis | - |
| dc.description.degree | Master | - |
| dc.citation.pages | vi, 60 | - |
| dc.contributor.affiliation | 자연과학대학 생명과학부 | - |
| dc.date.awarded | 2016-02 | - |
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