Regulation of Cellular Functions by the C-terminus of Transmembrane 4 L Six Family Members

Abstract

TM4SF1 (L6)와 TM4SF4 (IL-TMP), TM4SF5 (L6H) 등을 포함하는 transmembrane 4 L six family는 서로 30~50%의 서열 동일성을 가지며, 다른 tetraspanin들과도 유사하다. TM4SF5의 C 말단 부위가 세포 침윤성에 중요하다고 보여진 바가 있기에, family member들의 C 말단 부위 역시 세포 기능에 어떻게 중요한 역할을 담당하는지, 혹은 세포 침윤성 측면에서 서로 유사한지 의문을 가지게 되었다. 이에 나는 C 말단 결손 돌연변이와 C 말단을 서로 교차시킨 키메라 돌연변이를 각 family member 별로 제작하여 안정적으로 발현하는 대장암 세포주들을 만들었고, 2차원적 평면 환경과 3차원적 겔 환경에서 각각의 C 말단이 세포 행동을 어떻게 조절하는지 조사하였다. 2차원적 환경에서 각 family member들의 C 말단이 제거되었을 때는 세포 증식이 빨라졌고, 세포 증식에 있어서 서로 대체될 수 있도록 비슷한 역할을 하는 것으로 보였다. 하지만 배양액에서 스페로이드 형태로 3차원 환경에서 배양하였을 때 TM4SF5와 그것의 C말단이 TM4SF1과 그것의 C 말단 각각에 대비해서 스페로이드 형성능력이 높게 나타났다. 트랜스웰 이동 분석 시스템을 이용하자 세포 이동성 면에서 TM4SF5는 TM4SF1과 TM4SF4보다 우세하였고, TM4SF5의 C 말단을 TM4SF1 혹은 TM4SF4 의 C 말단과 교체 하였을 때, 트렌스웰 이동성이 증가하였다. 제1형 콜라겐 3차원 겔 환경에서는 스페로이드의 침윤적 이탈현상과 이동성이 증가하였다. 이러한 현상은 c-Src 활성과 긍정적으로 관련 있었다. TM4SF5의 세포외고리(extraelluar loop)와 세포내고리(intracellular loop) 그리고 C 말단으로 TM4SF1의 해당 부위를 교체하자 TM4SF1보다는 높지만, TM4SF5의 C말단으로 교체한 TM4SF1 보다는 낮은 이동성을 나타냈다. 그리고 TM4SF5의 세포외고리만 TM4SF1의 해당 부위에 교체하자 이동성을 기저 수준으로 무효화 하였다. 이러한 관찰 결과들은 TM4SF5의 세포내 부위들이 세포 증식을 제외하고, c-Src 관련 신호전달과 2차원과 3차원 환경에서의 이동성 촉진 역할을 중재한다는 것을 시사한다.