The efficacy of Klotho as a prognostic factor for hepatocellular carcinoma in dogs

Abstract

Klotho is an anti-aging gene and is known to act as a tumor suppressor in human hepatocellular carcinoma (HCC). According to a previous study, Klotho is present in normal canine mammary glands, and down-expression in tumors is positively associated with negative prognosis. However, the presence and significance of Klotho in canine HCC has not yet been reported. This study aimed to confirm Klotho expression in normal canine liver tissues using western blotting and immunohistochemistry, and whether the expression differed in non-neoplastic liver disease and HCC. Furthermore, correlation between clinicopathologic features and expression of Klotho was evaluated. All of the normal liver tissues showed the presence of Klotho, and Klotho expression was significantly decreased in the HCC tissue as compared to the non-neoplastic hepatic tissue. Additionally, Klotho expression was significantly associated with tumor size (P = .045), liver enzyme (alanine aminotransferase) (P = .018), and metastasis (P = .024). Analysis of the survival curve revealed that reduced Klotho expression was significantly associated with poor disease-free survival (P = .041) in HCC. These results show that Klotho expression is present in normal canine liver tissue and that reduced Klotho expression is associated with poor prognosis in canine HCC. Thus, Klotho was presumed to be a potential clinical prognostic marker for canine HCC.

Klotho는 항노화와 관련 된 유전자로, 사람의 간세포성 암종(hepatocellular carcinoma)에서 종양의 억제와 연관되어 있음이 알려져 있다. 이전 연구에 따르면 Klotho는 정상 개의 유선에 존재하며, Klotho의 감소된 발현이 불량한 예후와 유의미한 관련이 있음이 밝혀진 바 있다. 하지만, 개 간세포성 암종에서는 Klotho의 발현 유무뿐만 아니라 중요성에 대해서 밝혀진 바가 없다. 본 연구는 western blotting과 면역조직화학염색을 이용하여 정상 강아지 간에서 Klotho 발현을 확인하고, 정상간, 간질병, 간종양에서 발현이 변화하는지를 확인하는 것을 목표로 하였으며, 추가적으로 Klotho의 발현과 간세포성 암종의 예후와 관련 된 임상학적 지표들과의 연관성을 확인하였다. 모든 정상 간조직에서 Kltoho의 발현이 확인되었고, 종양화가 진행됨에 따라 Klotho의 발현비율이 유의미하게 감소하였다. 또한 종양의 크기, 간수치(ALT)의 상승, 전이여부는 Klotho의 저발현과 연관성이 있는 것으로 확인되었다. 간종양을 가진 개에 대한 생존곡선을 분석한 결과, Klotho의 발현이 무병 생존기간과 유의미하게 관련이 있는 것으로 나타났다. 이러한 결과는 Klotho가 개의 정상 간에서 발현되고, Klotho의 저발현이 개의 간세포성 암종에서 불량한 예후와 유의미한 연관성이 있음을 나타내며, 이는 Klotho의 개 간세포성암종에서 예후인자로서의 가능성을 제기할 수 있을 것으로 보인다.