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알코올에 의해 유도된 간 CYP3A 발현에서 콜레스테롤 대사로 생성된 내인성 Pregnane X Receptor 리간드의 역할
Role of Endogenous Pregnane X Receptor Ligands Formed by Enhanced Cholesterol Metabolism in the Ethanol-Induced Hepatic CYP3A Expression

DC Field Value Language
dc.contributor.advisor이병훈-
dc.contributor.author제영태-
dc.date.accessioned2017-07-13T16:35:43Z-
dc.date.available2017-07-13T16:35:43Z-
dc.date.issued2015-02-
dc.identifier.other000000025210-
dc.identifier.urihttps://hdl.handle.net/10371/120093-
dc.description학위논문 (박사)-- 서울대학교 대학원 : 약학과, 2015. 2. 이병훈.-
dc.description.abstract시토크롬 P450 (CYP) 3A4는 임상적으로 적용되는 약 50% 약물 대사에 관여하는 중요한 약물대사효소 (drug-metabolizing enzyme)이다. 최근 보고에 따르면 알코올이 CYP3A 발현을 유도 및 억제하는 것으로 알려져 있다. 이러한 CYP3A의 발현 변화는 체외물질의 감지에 중요한 역할을 수행하는 핵수용체인 pregnane X receptor (PXR)에 의해 주로 조절 받는 것으로 알려져 있다. 이전 연구에서 수행한 마이크로어레이 (microarray) 분석 결과에 의해 만성적인 알코올 섭취는 PXR에 의해 주로 조절 받는 체내 제1상 약물대사반응 (phase I drug metabolism reaction), 제2상 접합 반응 (phase II conjugation reaction) 및 제3상 체외물질/약물 수송 반응 (phase III xenobiotic/drug transport reaction)에 관련된 유전자들의 발현을 증가시켰다. 본 연구에서는 만성적인 알코올을 섭취한 마우스에서 CYP3A의 발현이 PXR 내인성 리간드인 5β-cholestane-3α, 7α, 12α-triol (triol)과 7α-hydroxy-4-cholestene-3-one (7α-4C)의 증가로 인해 일어난다는 것을 검증하고 담즙산 생합성 경로에서 리간드 생성에 관여하는 CYP8B1의 역할을 제시하고자 한다.
만성적인 알코올에 의한 핵수용체들과 표적분자들의 유전자 변화를 분석하기 위하여 Lieber-DeCarli 알코올 액체식이를 섭취한 간질환 모델을 이용하였다. 시간에 따른 변화를 분석한 결과 Phase I, II 및 III에 관여하는 유전자들과 이를 조절하는 핵수용체들의 발현이 증가된다는 것을 확인하였다. 특히 콜레스테롤 대사체들에 의해 활성화되는 PXR과 표적분자인 Cyp3a11의 mRNA 발현이 증가한다는 것을 확인하였다. PXR 내인성 리간드로 알려진 triol과 7α-4C의 변화를 분석하기 위하여 GC/MS 분석법을 이용하였다. 시간에 따른 대사체들의 변화를 분석한 결과 PXR 내인성 리간드들의 변화는 알코올 섭취정도와 관련성이 있다는 것을 확인하였다. 또한 Lieber-DeCarli 알코올 액체식이를 섭취한 간질환 모델에서 담즙산 생합성 경로의 cholic acid (CA)와 chenodeoxy cholic acid (CDCA)의 양조절에 관여하는 CYP8B1의 발현이 유의적으로 증가한다는 것을 확인하였다. 알코올 처리에 의한 CA 생성과 관련하여 CYP8B1의 역할을 분석하기 위하여 간세포주에 CYP8B1 siRNA를 처리한 실험에서 CA의 생성이 감소된다는 것을 확인하였다.
본 연구에서는 만성적인 알코올 섭취로 증가된 PXR 내인성 리간드에 의해 CYP3A11의 발현이 증가된다는 것과 간세포주에서 급성적인 알코올 투여에 의해 담즙산 생합성 경로에서 PXR 내인성 리간드 생성에 CYP8B1이 중요한 역할을 한다는 것을 확인하였다. 더욱이 이러한 결과들로부터 알코올 섭취에 의한 식품과 의약품 (food-drug)과 의약품과 의약품 (drug-drug)의 상호작용 예측을 이해하는 데에 중요한 정보로 활용될 것으로 기대가 된다.
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dc.description.tableofcontents국문초록
목 차
List of Tables
List of Figures
List of Abbreviations
I. 서 론
1.1. 알코올에 의한 대사 이상 (metabolic abnormalities)
1.2. 시토크롬 P450 3A (CYP3A)
1.2.1. 약물대사효소 (drug-metabolizing enzyme)로서 CYP3A
1.2.2. 알코올 대사 역할로서의 CYP3A
1.2.3. CYP3A 유도와 약물대사
1.3. 내⋅외부물질 감지로서 핵수용체 (nuclear receptor)
1.3.1. 핵수용체의 종류와 기능
1.3.2. Pregnane X receptor (PXR) 활성화와 기능
1.3.3. 체외물질 대사 역할로서의 PXR
1.3.4. PXR 리간드 (ligand)
1.3.4.1. 외인성 화합물에 의한 PXR 활성화
1.3.4.2. 내인성 화합물에 의한 PXR 활성화
1.4. 간에서의 담즙산 생합성 대사
1.5. 연구 목적
Ⅱ. 실험재료 및 방법
2.1. 시약 및 재료
2.2. 세포배양
2.3. 동물처치
2.4. RNA 분리 및 실시간 정량 중합효소 연쇄반응
2.5. 임상화학적 분석
2.6. CYP3A11 활성 측정
2.7. 면역조직화학염색 분석
2.8. Western blot 분석
2.9. Electrophoretic mobility shift assay (EMSA)
2.10. Chromatin Immunoprecipitation (ChIP)
2.11. Gas chromatography-mass spectrometry (GC/MS) analysis of oxystreols and bile acids
2.12. Liquid chromatography-electrospray ionization-tandem mass spectrometry (LC-ESI-MS/MS) analysis of cholic acid
2.13. Determination of liver cholesterols
2.14. Transfection with siRNA
2.15. 통계분석
III. 실험결과
3.1. 알코올에 의한 간질환 유도와 약물대사효소 및 핵수용체들의 변화
3.1.1. 알코올성 간질환 유도
3.1.2. 알코올에 의한 Phase I, II 및 III drug transporter들의 발현 변화
3.2. 알코올에 의한 CYP3A11 발현과 조절에 관여하는 PXR 역할
3.2.1. CYP3A11의 발현과 활성 변화
3.2.2. PXR의 발현 변화
3.2.3. 간세포내의 핵 PXR의 발현 변화
3.2.4. Cyp3a11 프로모터에 PXR의 결합 변화
3.2.5. 알코올에 의한 핵수용체들의 발현 변화
3.3. 알코올에 의한 콜레스테롤 대사체들과 대사효소들의 변화
3.3.1. 내인성 PXR 리간드들의 변화
3.3.2. 담즙산 생합성과 관련된 콜레스테롤 대사체들의 변화
3.3.3. 콜레스테롤 대사효소들의 발현 변화
3.3.4. 알코올에 의한 CYP8B1의 역할
Ⅳ. 고 찰
Ⅴ. 결 론
Ⅵ. 참고문헌
영문초록
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dc.formatapplication/pdf-
dc.format.extent1964491 bytes-
dc.format.mediumapplication/pdf-
dc.language.isoko-
dc.publisher서울대학교 대학원-
dc.subject알코올-
dc.subjectPregnane X receptor-
dc.subject약물대사효소-
dc.subject시토크롬 P540 3A-
dc.subject콜레스테롤-
dc.subject.ddc615-
dc.title알코올에 의해 유도된 간 CYP3A 발현에서 콜레스테롤 대사로 생성된 내인성 Pregnane X Receptor 리간드의 역할-
dc.title.alternativeRole of Endogenous Pregnane X Receptor Ligands Formed by Enhanced Cholesterol Metabolism in the Ethanol-Induced Hepatic CYP3A Expression-
dc.typeThesis-
dc.contributor.AlternativeAuthorJe Young Tae-
dc.description.degreeDoctor-
dc.citation.pagesx, 92-
dc.contributor.affiliation약학대학 약학과-
dc.date.awarded2015-02-
Appears in Collections:
College of Pharmacy (약학대학)Dept. of Pharmacy (약학과)Theses (Ph.D. / Sc.D._약학과)
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