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재조합 단백질 Lin28-30Kc19을 이용한 유도만능줄기세포의 생산과 그 효과 : Effect of recombinant Lin28-30Kc19 protein on the generation of induced pluripotent stem cells (iPSCs)
DC Field | Value | Language |
---|---|---|
dc.contributor.advisor | 박태현 | - |
dc.contributor.author | 윤형로 | - |
dc.date.accessioned | 2017-07-14T02:23:57Z | - |
dc.date.available | 2017-07-14T02:23:57Z | - |
dc.date.issued | 2016-08 | - |
dc.identifier.other | 000000135966 | - |
dc.identifier.uri | https://hdl.handle.net/10371/122461 | - |
dc.description | 학위논문 (석사)-- 서울대학교 대학원 : 협동과정 바이오엔지니어링전공, 2016. 8. 박태현. | - |
dc.description.abstract | 유도만능줄기세포(iPSC)는 배아줄기세포(ESC)와 동일한 세포생물학적 특징들인 자가재생력(self-renewal), 전분화능(pluripotency)을 가진 줄기세포의 한 종류이다. 배아줄기세포와 달리 유도만능줄기세포는 성인의 체세포로부터도 얻을 수 있기에 윤리적인 문제에서 오는 연구적 제약이 없기 때문에 줄기세포 연구분야에서 가장 주목받고 있다. 그렇기에 유도만능줄기세포의 생산성은 매우 중요한 이슈이며 많은 연구진들이 이를 향상시키기 위해 노력하고 있다. 본 연구에서는 종래의 유도만능줄기세포 생산방법에 추가적으로 선행연구에서 재프로그램화 인자(reprogramming factor) 중 하나로 밝혀진 Lin28을 단백질의 형태로 세포에 처리하여 그 생산성을 높이는 효과를 보았다. Lin28은 인간의 몸에서 Lin28A와 Lin28B 두 가지 종류로 존재하는데 이 중 Lin28A를 사용하였다. (재프로그램화 인자로 사용되는 것은 Lin28A이므로 이후로는 Lin28로 표기) Lin28 단백질은 세포질에서 기능을 하기 때문에 세포 내부로 전달하기 위해 누에 유래의 세포투과성 단백질로 알려진 30Kc19을 Lin28 단백질의 C-말단에 연결시킨 형태의 재조합 단백질 Lin28-30Kc19으로 제작하였다. Lin28-30Kc19은 대장균에서 생산한 후 정제하여 바이러스의 형태로 세포에 전달되는 4개의 재프로그램화 인자인 Oct4, Sox2, c-Myc, Klf4와 함께 인간 체세포인 인간 피부 섬유아세포(human dermal fibroblast, HDF)에 처리하였다. 14일 간의 세포 배양 후, 알칼리포스파타제 염색법(alkaline phosphatase staining)을 이용해 생성된 유도만능줄기세포를 확인하였다. Lin28-30Kc19 단백질을 처리한 실험군의 경우 초기 생성에서 대조군에 비해 염색된 콜로니의 개수가 증가하였고, 최종적으로 개별 콜로니의 크기 또한 두 배 가량 증가하고 발색도 강해진 것을 관찰할 수 있었다. 본 연구로 재조합 단백질을 이용하여 종래의 유도만능줄기세포 생산성을 높일 수 있는 방법을 제시하였으며, 향상된 생산성을 통해 줄기세포 연구와 의ㆍ약학 분야에서의 응용에 필요한 줄기세포들의 원활한 공급이 가능해지길 기대하고 있다. | - |
dc.description.tableofcontents | 1. 서론 7
1.1. 누에 체액 유래 단백질 30Kc19에 관한 선행 연구 7 1.1.1. 누에 체액 7 1.1.2. 30K 단백질의 특성 7 1.1.3. 30Kc19 단백질의 세포막 투과 능력 8 1.2 유도만능줄기세포의 연구현황 11 2. 실험 재료 및 방법 13 2.1. pET-23a/Lin28, pET-23a/Lin28-30Kc19 plasmid 제작 13 2.2. Lin28-30Kc19 단백질 발현 및 정제 15 2.3. Western blot analysis 16 2.3.1. Lin28-30Kc19 단백질의 확인 16 2.3.2. Lin28-30Kc19 단백질의 안정성 17 2.3.3. Lin28-30Kc19 단백질의 세포 투과성 확인 17 2.4. 면역세포화학적 분석(Immunocytochemical analysis) 18 2.5. Lin28-30Kc19 단백질의 시간과 농도에 따른 응집현상 19 2.6. CCK-8 assay를 통한 Lin28-30Kc19 단백질의 세포 독성 검사 19 2.7. 유도만능줄기세포 20 2.7.1. 바이러스 생산 20 2.7.2. 유도만능줄기세포의 생산 21 3. 결과 및 고찰 22 3.1. 단백질 생산을 위한 발현용 벡터들의 제작 22 3.2. 생산된 벡터들의 크기 확인 및 정량적 분석 24 3.3. Lin28-30Kc19 단백질의 세포 투과성 28 3.4. Lin28-30Kc19 단백질의 안정성 31 3.4.1. Lin28-30Kc19 단백질의 응집 현상 31 3.4.2. Lin28-30Kc19 단백질의 안정성 33 3.5. Lin28-30Kc19 단백질의 세포 독성 확인 35 3.6. 유도만능줄기세포의 생산 37 4. 결론 44 5. 참고문헌 46 Abstract 51 | - |
dc.format | application/pdf | - |
dc.format.extent | 1797458 bytes | - |
dc.format.medium | application/pdf | - |
dc.language.iso | ko | - |
dc.publisher | 서울대학교 대학원 | - |
dc.subject | 유도만능줄기세포 | - |
dc.subject | 30Kc19 | - |
dc.subject | Lin28 | - |
dc.subject | 재프로그램화 | - |
dc.subject | 인간 피부 섬유아세포 | - |
dc.subject.ddc | 660 | - |
dc.title | 재조합 단백질 Lin28-30Kc19을 이용한 유도만능줄기세포의 생산과 그 효과 | - |
dc.title.alternative | Effect of recombinant Lin28-30Kc19 protein on the generation of induced pluripotent stem cells (iPSCs) | - |
dc.type | Thesis | - |
dc.contributor.AlternativeAuthor | Hyungro Yoon | - |
dc.description.degree | Master | - |
dc.citation.pages | 52 | - |
dc.contributor.affiliation | 공과대학 협동과정 바이오엔지니어링전공 | - |
dc.date.awarded | 2016-08 | - |
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