Chemical constituents from diospyros burmanica leaves and barks

Abstract

Diospyros burmanica는 Ebenaceae (감나무과)에 속하는 상록활엽수로서 미얀마 Mandalay 지역에 자생하는 식물이다. 미얀마 현지에서는 민간의약학 적으로 이질, 설사, 당뇨의 치료에 사용하고 있으며 Burmese ebony 라 하여 목재의 용도로 이용되고 있다. Diospyros 속 식물은 전 세계적으로 350종 이상이 알려져 있는데 그 중 D. kaki, D. lotus, D. melanoxylon 등이 식용할 수 있는 과실로 인해 가장 잘 알려져 있고 그 외 다수 Diospyros 속 식물은 심재의 아름다운 색으로 인하여 목재로서 건축자재의 용도로 이용되고 있다. 하지만 D. burmanica의 경우 현지 토착민의 사용 예가 있음에도 전 세계적으로 일본 연구진에 의한 리슈만편모촌충증(Leishmaniasis) 활성 이외의 과학적인 연구가 되어 있지 않으므로 본 연구는 D. burmanica의 수피에서 식물화학 성분을 분리, 규명하고자 하였다. 건조된 D. burmanica의 수피 1.1 kg 을 100% 메탄올로 추출하여 얻은 추출물을 증류수에 현탁한 후 메틸렌클로라이드, 에틸아세테이트, 부탄올, 수용액 층으로 각각 분획하였다. 이후 이 분획을 silica gel column chromatography, counter current chromatography, HP column chromatography, ODS-A gel column chromatography, MPLC, HPLC 등을 이용하여 8종의 flavonoid 와 5종의 triterpene을 분리하였다. 분리한 화합물들은 UV, Q-TOF LC/MS, FAB-LRMS, 1H-NMR, 13C-NMR, 1H-1H COSY, HSQC, HMBC spectrum 등의 분광학적 데이터를 종합하여 보고된 자료와 비교한 후 그 구조를 각각 (-)-catechin 3-O-α-L-rhamnopyranoside (1), (-)-catechin(2), methyl gallate (3), (-)-2,3-trans-dihydrokaempferol 3-O-rhamnopyranoside (4), (-)-epicatechin 3-O-gallate (5), (+)-catechin 3-O-gallate (6), (-)-epicatechin (7), (+)-afzelechin 3-O-α-L-rhamnopyranoside(8), lupeol(9), methyl lup-20(29)-en-3-one-28-oic acid(10), 3β-hydroxy-D:B-friedo-olean-5-ene (11), β-amyrin (12), urs-12-ene-3β-ol(13) 으로 동정하였다. 이 모든 화합물들은 Diospyros burmanica에서 처음 분리 보고되는 물질이다. 13종의 분리한 화합물에 대해 lipopolysaccharide (LPS)를 처리하여 NO 생성을 유도한 BV2 microglia세포주를 검색계로 하여 NO 생성 억제율을 측정하였다. 이 중 화합물 1, 3, 4, 8 (catechins and methyl gallate)이 유의성 있는 저해 활성을 나타내었다. 또한 catechin 계열 화합물의 경우, 3번 탄소에 당의 결합 여부가 활성에 영향을 미치는 것으로 나타났다.

Diospyros burmanica Kurz is the evergreen broad-leaved tree distributed in Mandalay of Myanmar, which belongs to the family of Ebenaceae. In Myanmar, it is used to treat diarrhea, diabetes, and shigellosis. More than 350 plants belonging to the genus Diospyros are known worldwide. However, not many on D. burmanica are studied yet except for the leishmaniasis inhibiting properties studied by Japanese researchers. Thus, the objective of this study is to isolate and identify the chemical constituents from the leaves and the barks of Diospyros burmanica. Dried leaves and barks of Diospyros burmanica are extracted with 100% methanol, suspended in distilled water and fractionated with methylene chloride, ethyl acetate, and n-buthanol. Then through silica gel column chromatography, counter current chromatography, HP column chromatography, ODS-A gel column chromatography, MPLC, HPLC, seven flavonoids, a methyl gallate, and five triterpenes were isolated. Isolated compounds were identified as (-)-catechin 3-O-α-L-rhamnopyranoside (1), (-)-catechin (2), methyl gallate (3), (-)-2,3-trans-dihydrokaempferol 3-O-rhamnopyranoside (4), (-)-epicatechin 3-O-gallate (5), (+)-catechin 3-O-gallate (6), (-)-epicatechin (7), (+)-afzelechin 3-O-α-L-rhamnopyranoside (8), lupeol (9), methyl lup-20(29)-en-3-one-28-oic acid (10), 3β-hydroxy-D:B-friedo-olean-5-ene (11), β-amyrin (12), urs-12-ene-3β-ol (13) from UV, Q-TOF LC/MS, FAB-LRMS, 1H-NMR, 13C-NMR, 1H-1H COSY, HSQC, and HMBC spectrum. Compounds 1, 3, 4, and 8 (catechins and methyl gallate) showed significant inhibitory effect on NO production induced by lipopolysaccharide on the BV2 microglia cell line. Also catechin type compounds showed significant difference in their activity depending on the substitution of the glycosides on C-3 position.