Rat mdr1a(p-glycoprotein)의 cloning과 이를 발현하는 MDCK cell line의 구축

Abstract

약물수송체(Drug transporter)는 여러 장기에 분포되어 있으며, 약물의 흡수, 분포와 배설에 크게 기여한다. 또한 약물수송체를 유도하거나 저해하는 약물상호작용(Drug-drug interaction)은 약물 대사의 변화에 중요한 역할을 한다. 이 때문에 미국 FDA는 약물상호작용에 많은 영향을 미치는 약물수송체 7가지를 선정하여, 신약개발 과정에서 후보물질이 이들 수송체의 기질 혹은 저해제로 작용하는지 조사단계가 필요하다고 명시하고 있다. 약물상호작용은 in vivo 상으로 관찰하는 것이 가장 정확하나, 비용도 많이 들뿐더러 위험하므로 그에 앞선 in vitro 실험으로 불필요한 in vivo 실험을 방지할 필요가 있다. 따라서 rat의 in vitro 약물상호작용 평가 체계가 구축되어 있다면 rat과 human의 in vitro 자료의 상관성을 이용하여, 직접적으로 구하기 힘든 human에서의 in vivo 상호작용 결과를 예측하는데 큰 도움이 될 것으로 기대된다. 본 실험에서는 그러므로 FDA 선정 7가지 수송체 중 하나인 MDR1 (P-glycoprotein)에 해당하는 rat에서의 mdr1a를 cloning 하기로 하였다. Rat mdr1a가 많이 발현 된 liver RNA로부터 Reverse transcription과 PCR(Polymerase Chain Reaction)을 통해 mdr1a를 coding하는 부분을 증폭시켰다. 그리고 PCR을 통해 얻은 mdr1a DNA를 pcDNA5/FRT vector 내로 cloning 하였다. 완성된 rat mdr1a clone을 MDCK II/FRT cell에 transient하게 transfection하였고, RT-PCR을 통하여 mRNA 발현을 확인하였다. 이어서 function study를 하였는데, mock cell과 mdr1a transfected MDCK II/FRT cell 간에 유의적인 function의 차이를 관찰하지 못하였다. 여러 원인이 존재할 수 있는데, 이를 보완하면 stable한 rat mdr1a-MDCK II/FRT cell line을 확보할 수 있을 것이라 생각된다. 확보한 rat mdr1a cell line은 후에 신약개발단계에서 약물상호작용 평가에 쓰일 수 있을 것으로 기대된다.