Layer-by-layer Cell Coating with Hydrogel Film for Cell Therapy

Abstract

Cell therapy has been emerged as a promising approach for severe diseases. However, the efficacy of cell therapy is limited by low cell survival owing to external stress during and after transplantation. In this study, we constructed a layer-by-layer cell coating platform with hydrogel film that provides cells a cytoprotective barrier. The hydrogel film was stabilized by Streptomyces avermitilis-derived tyrosinase (SA-Ty) which mediate oxidative coupling reactions of mono-phenols. Hydrogel film-coated cells were characterized by measuring zeta potential, fluorescence intensity, and TEM imaging. The 6-layer stacked hydrogel film was as thick as 139.40 nm. Cell viability was not deteriorated by coating procedures. Furthermore, hydrogel film was fabricated on β-cell spheroids for the application in the field of islet transplantation. Confocal image showed thin, uniform, and compact film layers on β-cell spheroids. In addition, hydrogel film-coated β-cell spheroids showed higher insulin secretion ability than the native β-cell spheroids. At last, the cytoprotective effects of the hydrogel film against physical and oxidative stress were evaluated in vitro. Overall, we expect our fast, facile, durable, and layer-controllable cell coating technique will offer a great potential for clinical applications in cell therapy.

세포치료제는 중증 질환에 대한 치료법으로 주목을 받고 있다. 하지만, 세포치료제의 효능은 주사 시 또는 투여 후 외부 스트레스로 인해 그 생존율이 낮다는 한계점이 있다. 본 연구에서는 생체 적합 및 세포 보호 하이드로겔 필름을 사용하여 적층식 세포 코팅 플랫폼을 구축하였다. 하이드로겔 막 형성을 촉진하기 위하여, 반대 전하를 띄며 Streptomyces avermitilis 유래 타이로시네이즈 매개 산화 커플링 반응을 통해 세로 표면의 작용기와 공유결합을 형성하거나 교차결합하는 히알루론산 및 글라이콜 키토산에 단일페놀 그룹을 도입하였다. 하이드로겔 필름이 코팅된 세포는 제타 전위, 형광 세기를 측정하고 TEM 이미지를 측정하여 확인되었다. 6개 층이 쌓인 하이드로겔 필름은 139.40 nm였다. 코팅 과정 후 세포의 생존율은 나빠지지 않았다. 더 나아가, 췌도 이식에의 활용을 위하여 베타 세포 스페로이드의 표면에 하이드로겔 필름을 형성하였다. 컨포칼 이미지에서 얇고, 균일하고, 압축되어 있는 필름 층을 관찰할 수 있었다. 더욱이, 하이드로겔 필름이 코팅된 베타 세포 스페로이드는 일반 세포보다 더 높은 인슐린 분비 능력을 보였다. 마지막으로, 하이드로겔 필름의 물리적, 산화 스트레스에 대한 세포 보호 효과가 확인되었다. 따라서, 우리가 개발한 빠르고, 편리하고, 단단하고, 층 수 제어가 가능한 세포 코팅 기술이 세포치료제의 임상 활용에 있어 큰 잠재력을 부여할 것으로 기대한다.