Multiplex polymerase chain reaction for the detection and differentiation of 4 porcine circovirus 2 genotypes (PCV-2a, -2b, -2d, and -2e) in clinical samples

Abstract

Copyright and/or publishing rights held by the Canadian Veterinary Medical Association.The objective of this study was to develop multiplex polymerase chain reaction (PCR) for the simultaneous detection of porcine circovirus 2 (PCV-2) and differentiation among 4 PCV-2 genotypes (2a, 2b, 2d, and 2e) in collected clinical lymph node samples. The multiplex PCR detected each of 4 PCV-2 genotypes (2a, 2b, 2d, and 2e) to a dilution of 2 × 101 copies/μL. PCV-2a, PCV-2b, PCV-2d, and PCV-2e were propagated in tissues prior to DNA extraction for use in multiplex PCR for the simultaneous detection and differentiation of 4 PCV-2 genotypes. The designed multiplex PCR effectively detected and differentiated various combinations of multiple infection, such as PCV-2a+2b, PCV-2a+2d, PCV-2b+2d, PCV-2a+2e, and PCV-2a+2b+2d, in clinical lymph node samples. The results of this study demonstrated that multiplex PCR testing of clinical samples developed herein was able to simultaneously detect and differentiate among the 4 PCV-2 genotypes (PCV-2a, 2b, 2d, and 2e). Lobjectif de cette étude était de développer une réaction en chaîne par la polymérase multiplex (PCR) pour la détection simultanée du circovirus porcin 2 (PCV-2) et la différenciation entre quatre génotypes PCV-2 (2a, 2b, 2d et 2e) dans des échantillons cliniques de noeuds lymphatique. La PCR multiplex a détecté chacun des quatre génotypes PCV-2 (2a, 2b, 2d et 2e) à une dilution de 2 × 101 copies/μL. Le PCV-2a, le PCV-2b, le PCV-2d et le PCV-2e ont été propagés dans les tissus avant lextraction de lADN pour être utilisés dans la PCR multiplex pour la détection et la différenciation simultanées de quatre génotypes du PCV-2. La PCR multiplex conçue a efficacement détecté et différencié diverses combinaisons dinfections multiples, telles que PCV-2a+2b, PCV-2a+2d, PCV-2b+2d, PCV-2a+2e et PCV-2a+2b+2d, dans les échantillons cliniques de ganglions lymphatiques. Les résultats de cette étude ont démontré que le test PCR multiplex des échantillons cliniques développés ici était capable de détecter et de différencier simultanément les quatre génotypes PCV-2 (PCV-2a, 2b, 2d et 2e).(Traduit par Docteur Serge Messier).